细胞铺板计算器（每孔细胞数与铺板密度）
填细胞计数结果和每孔要铺多少细胞（也可以按 cells/cm² 密度），选孔板和孔数，马上得到细胞悬液取量和培养基补加量。
输入
可写 1e6 表示 1×10⁶
每孔目标
结果
- 细胞总数
- 1.32×10⁶
- 细胞悬液 (取量)
- 1.32 mL
- 培养基 (补加)
- 11.88 mL
- 总体积
- 13.20 mL
常见孔板参数
| 孔板 | 单孔面积 | 常用每孔体积 |
|---|---|---|
| 6 孔 | 9.5 cm² | 2 mL |
| 12 孔 | 3.8 cm² | 1 mL |
| 24 孔 | 1.9 cm² | 0.5 mL |
| 48 孔 | 0.95 cm² | 0.3 mL |
| 96 孔 | 0.32 cm² | 0.1 mL |
按 Corning 平底细胞培养板常用值，不同品牌略有差异，要求精确时以说明书为准。切换孔板会按整板孔数和常用体积预填。
公式
每孔细胞数 = 密度 (cells/cm²) × 单孔面积 (cm²)
悬液 (mL) = 每孔细胞数 × 孔数 × 1.1 ÷ 悬液浓度 (cells/mL)
培养基 (mL) = 每孔体积 (mL) × 孔数 × 1.1 − 悬液
提示: 不勾选多备 10% 时，公式里的 × 1.1 去掉。悬液浓度可以写成 1e6，表示 1×10⁶ cells/mL。
这一步算对了，但整个实验有几十个参数联动。改一个稀释倍数，下游全要重算。在 Vara 里把整套实验的参数连起来，改一个自动重算全部。免费管理 3 个实验。
公式怎么来的
- 先定每孔要多少细胞。方案给的是每孔细胞数就直接用；给的是铺板密度 (cells/cm²)，就乘单孔生长面积：每孔细胞数 = 密度 × 单孔面积。本页用的面积是 6 孔 9.5、12 孔 3.8、24 孔 1.9、48 孔 0.95、96 孔 0.32 cm²。
- 再算等效孔数。要铺 N 孔，勾选多备 10% 时按 N × 1.1 孔准备，不勾选就按 N 孔。
- 总细胞数 = 每孔细胞数 × 等效孔数。
- 悬液体积 = 总细胞数 ÷ 悬液浓度 (cells/mL)。悬液浓度用计数得到的活细胞浓度。
- 总体积 = 每孔培养体积 × 等效孔数，培养基补加量 = 总体积 − 悬液体积。悬液和培养基混成一管，每孔加同样的体积，每孔拿到的就是目标细胞数。
- 如果悬液体积比总体积还大，说明悬液太稀，靠加培养基稀释达不到目标，要先离心浓缩，重新计数再算。
算例
96 孔板：每孔 5000 个细胞，铺内圈 60 孔
- 已知：活细胞浓度 1×10⁶ cells/mL，每孔 5000 个细胞，每孔 100 μL (0.1 mL)，铺内圈 60 孔，勾选多备 10%。
- 等效孔数：60 × 1.1 = 66 孔。
- 总细胞数：5000 × 66 = 330,000 个，即 3.3×10⁵。
- 悬液体积：3.3×10⁵ ÷ 1×10⁶ cells/mL = 0.33 mL，即 330 μL。
- 总体积：0.1 mL × 66 = 6.6 mL。培养基补加量：6.6 − 0.33 = 6.27 mL。
- 操作：330 μL 悬液加 6.27 mL 培养基，混匀后每孔加 100 μL。换成密度是 5000 ÷ 0.32 = 15,625 cells/cm²，以后换板型可以按这个密度算。
6 孔板：按 2×10⁴ cells/cm² 铺一整板
- 已知：活细胞浓度 1×10⁶ cells/mL，密度 2×10⁴ cells/cm²，每孔 2 mL，铺 6 孔，勾选多备 10%。
- 每孔细胞数：2×10⁴ × 9.5 cm² = 1.9×10⁵ 个。
- 等效孔数：6 × 1.1 = 6.6 孔。
- 总细胞数：1.9×10⁵ × 6.6 = 1.254×10⁶ 个。
- 悬液体积：1.254×10⁶ ÷ 1×10⁶ cells/mL = 1.254 mL。
- 总体积：2 mL × 6.6 = 13.2 mL。培养基补加量：13.2 − 1.254 = 11.946 mL。
- 页面上体积保留两位小数，显示为悬液 1.25 mL、培养基 11.95 mL、总体积 13.20 mL；细胞数保留 3 位有效数字，总数显示为 1.25×10⁶。混匀后每孔加 2 mL。
常见错误
照抄上次的悬液体积
上次取了 330 μL，这次就直接再取 330 μL。每次消化计数的浓度都不一样，悬液体积要按当次的浓度重算，培养基补加量也跟着变。
多备的 10% 只加在培养基上
只多配培养基、不多配细胞，每孔细胞数会比计划少。余量要同时乘在细胞和培养基上，本页的等效孔数就是这样处理的，浓度不变。完全不留余量也常出问题：最后几孔不够加。
用总细胞数代替活细胞数
活率 80% 时按总细胞数算，每孔实际铺下去的活细胞只有计划的 80% 左右。用台盼蓝或计数仪给出的活细胞浓度来算。
计数时漏乘稀释倍数
血球计数板一个大方格的体积是 0.1 μL，平均每格细胞数 × 10⁴ × 稀释倍数 = cells/mL。和台盼蓝 1:1 混合后计数要再乘 2，漏乘会让后面所有数都差一倍。
加板过程中没有反复混匀
悬液放一会儿细胞就往下沉，先加的孔和后加的孔细胞数会不一样。加样过程中隔几列就轻轻吹打或颠倒混匀一次。铺完后前后、左右轻推平板，不要转圈晃，否则细胞容易堆在孔中央或孔边。
没有考虑边缘效应
外圈孔蒸发更快、温度变化更大，细胞生长和读数常和内圈不同。铺完先在室温静置一段时间再放进培养箱、外圈加 PBS 或培养基不用于实验，都是常见做法，具体以你的方案为准。